Protonation Sp cifique Des M thyles

Les méthodes RMN appliquées ŕ l'étude structurale des protéines sont basées sur la mesure d'informations géométriques locales entre protons. Le manque de contraintes ŕ longue portée est un facteur limitant pour l'étude des protéines de grande taille. La deutération de ces systčmes est nécessaire pour leurs études. Néanmoins, le remplacement des protons par du deutérium limite le nombre de contraintes structurales observables. Pour résoudre ce problčme, une stratégie basée sur la protonation spécifique des méthyles a été mise en place, ils constituent un choix optimal pour l'obtention de contraintes ŕ longue portée. Les protocoles de marquage spécifique des méthyles des Isoleucines, des Valines et des Leucines ont été optimisés, et une nouvelle méthode de protonation spécifique des Alanines a été développée. Dans des systčmes de taille modérée, l'utilisation de ce type de marquage combiné aux développements d'expériences RMN adaptées permet la détection de contraintes entre paire de méthyles séparés par plus de 12Ĺ. Cette approche s'applique également ŕ des protéines de grande taille, ainsi des NOEs entre méthyles distants par plus de 7Ĺ sont détectés dans un systčme de 468kDa